Die Amplifikation

Die PCR läuft in drei Phasen ab. Zunächst wird das Template bei 94-95 °C denaturiert, also der DNA-Doppelstrang in Einzelstränge getrennt. Dann lagern sich während der nachfolgenden Abkühlung die im Überschuss vorliegenden Primer (Oligonucleotide) an die Einzelstränge an. Im anschließenden dritten Schritt verlängert die Polymerase die von Primern besetzten Einzelstränge zum Doppelstrang. Pro Schritt wird also die DNA-Menge verdoppelt. Nach spätestens 20-30 Zyklen ist die Lösung erschöpft, und es findet keine weitere Vermehrung mehr statt.

Dieser Vorgang wird hier in einer Animation verdeutlicht. Das Ausgangsmaterial, schwarze Balken mit zwei Haken, liegt in wenigen Kopien vor. Dann bildet sich das Verlängerungsprodukt (Primer plus grüne Balken mit Haken). Schließlich bildet sich das Endprodukt (Primer plus grüne Balken ohne Haken). Während die Menge an Ausgangsmaterial konstant bleibt und das Verlängerungsprodukt linear zunimmt, wächst die Menge an Endprodukt exponentiell.

Abb.1Amplifikationsschema der PCR