Die Zyklen der PCR in der Praxis

In der Praxis wird vor den drei sich immer wiederholenden Schritten eine einmalig verlängerte Denaturierung durchgeführt. Für das Aufbrechen der nativen räumlichen Strukturen der Template-DNA muss beim ersten Mal mehr Energie als sonst aufgebracht werden. Ferner hat sich gezeigt, dass ein abschließender, zeitlich erweiterter Primer-Verlängerungsschritt zu einer erhöhten Ausbeute führt. Nach Beendigung dieses letzten Schrittes werden die Proben bis zur Entnahme auf 4 °C abgekühlt.

Durchführung der PCR

  1. Einmalige Denaturierung: Verbessertes Aufschmelzen zu Beginn des Zyklus (30 s bei 95 °C).

  2. Denaturierung: Aufschmelzen der DNA, des so genannten Templates.

  3. Primer-Annealing: Anlagerung der Primer an das Template.

  4. Primer-Extension: Verlängerung der Primer.

  5. Einmalige, lange Primer-Extension zum Auffüllen eventuell verbliebener kurzer Fragmente (7 min bei 72 °C).

  6. Lagerung der Proben (bei 4 °C).

Der+zyklische+Ablauf+einer+PCR
Abb.1Der zyklische Ablauf einer PCR
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