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Puffer und Lösungen

Prähybridisierungslösung:

  • 6fach Standard Sodium Citrate (SSC)
  • 6fach Standard Sodium Phosphate EDTA (SSPE)
  • 0,5 % SDS
  • 5 x Denhardt-Lösung
  • 100 µg/mL denaturierte DNA aus Lachssperma
Hinweis
Die Lachssperma-DNA wird mit der Schere zerschnitten, kurz mit Ultraschall behandelt und dann autoklaviert oder aufgekocht.

Hybridisierungslösung:

  • Vorhybridisierungslösung (2-5 mL)
  • frisch denaturierte DNA-Sonde

Waschpuffer:

  • 2 x SSC
  • 0,1 % SDS

Denhardt-Stammlösung (50x)

Die Denhardt-Lösung (nach Denhardt, 1966) ist ein spezielles Reagenz zur Blockierung der freien Bindungsstellen auf Nitrocellulose- oder Nylon-Membranen bei Blot-Verfahren.

  • 5 g Ficoll
  • 5 g Polyvinylpyrrolidon
  • 5 g BSA (Rinderserum-Albumin oder bovine serum albumine)
  • mit bidest. Wasser auf ein Volumen von 500 mL auffüllen

Diese Stammlösung wird zur Hybridisierung mit Prähybridisierungslösung 1:10 verdünnt (Endkonzentration: 5 x).

SSC (sodium citrate standard, 20 x)

  • 3 M NaCl
  • 0,3 M Na3-Citrat
  • pH 7,3

SSPE (20 x)

  • 3 M NaCl
  • 0,2 M NaH2PO4
  • 0,02 M EDTA
  • pH 7,4