Vorbereitung zum gentechnischen Praktikum
Kinasierung
Bei der Kinase-Behandlung überträgt das Enzym Polynucleotid-Kinase Phosphat-Gruppen von ATP-Molekülen auf die 5'-Hydroxy-Gruppen von einzel- und doppelsträngiger DNA. Diese Phosphorylierung ist erforderlich, wenn ein synthetisch hergestelltes Oligonucleotid für eine Ligationsreaktion eingesetzt werden soll, da Oligonucleotide im Gegensatz zu biologisch hergestellten DNA-Fragmenten am 5'-Ende nicht phosphoryliert sind und so kein gutes Substrat für die Ligase darstellen.
Nach der Reaktion wird das Enzym durch eine Hitzebehandlung inaktiviert (10 bei 65 ).